Klenov fragment
Klenov fragment je veliki proteinski fragment koji se formira kada se DNK polimeraza I iz E. coli enzimatski preseče posredstvom proteaze subtilisina. Prvobitno je opisan 1970.[1] On zadržava 5'-3' polimeraznu aktivnosti i 3’ → 5’ egzonukleaznu aktivnost za odvajanje prekodirajućih nukleotida i korekturu, ali gubi svoju 5' → 3' eksonukleaznu aktivnost.
Drugi manji fragment formiran kad se DNK polimeraza I iz E. coli preseče subtilisinom zadržava 5'-3' eksonukleaznu aktivnost, ali nema druga dva dejstva koje manifestuje Klenov fragment (i.e. 5'-> 3' polimerazna aktivnost i 3'->5' eksonukleazna aktivnost).
Istraživanja
5' → 3' egzonukleazno dejstvo DNK polimeraze I iz E. coli nije podesno za mnoge oblike primene, te stoga Klenov fragment, koji ne ispoljava tu aktivnost, može da bude veoma koristan u istraživanjima. Klenov fragment je ekstremno koristan u istraživačkim procesima kao što su:
- Sinteza dvolančane DNK iz jednolačanog obrasca
- Popunjavanje pobučenog 3' kraja DNK fragmenata da bi se dobili tupi 5' krajevi
- Uklanjanje isturenih 3' prepusta
- Priprema radioaktivnih DNK segmenata
Klenov fragment je isto tako bio originalni enzim koji se koristio za znatnu amplifikaciju segmenata DNK u procesu polimerazne lančane reakcije (PCR),[2] pre nego što je bio zamenjen termostablnim enzimima kao što je Taq polimeraza.[3]
Reference
- ↑ Klenow H and Henningsen I (1970). „Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis”. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 65 (1): 168–175. DOI:10.1073/pnas.65.1.168. PMC 286206. PMID 4905667.
- ↑ Saiki RK et al. (1985). „Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia”. Science 230: 1350–54. DOI:10.1126/science.2999980. PMID 2999980.
- ↑ Saiki et al. (1988). „Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase”. Science 239: 487–91. DOI:10.1126/science.2448875. PMID 2448875.
Vanjske veze
- MeSH Klenow+Fragment
- Diagram at vivo.colostate.edu Arhivirano 2006-11-15 na Wayback Machine-u
- p
- r
- u
i inicijacija
Prokariotska (inicijacija) | |
---|---|
Eukariotska (priprema u G1 fazi) | |
Oba | Početak replikacije/Ori/Replikon Replikaciona viljuška (zaostajući i vodeći lanci) • Okazakijev fragment • Prajmer |
Prokariotska (elongacija) | DNK polimeraza III holoenzim (dnaC, dnaE, dnaH, dnaN, dnaQ, dnaT, dnaX, holA, holB, holC, holD, holE) • Replizom • DNK ligaza • DNK stega • Topoizomeraza (DNK giraza) Prokariotska DNK polimeraza: DNK polimeraza I (Klenov fragment) |
---|---|
Eukariotska (sinteza u S fazi) | |
Oba |